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Oct 24, 2023

Immunogenicità di un secreto, C

Scientific Reports volume 13,

Rapporti scientifici volume 13, numero articolo: 296 (2023) Citare questo articolo

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Entrambi gli attuali vaccini con virus vivi, attenuati e uccisi per il virus della diarrea virale bovina (BVDV) hanno i loro limiti. Qui, riportiamo lo sviluppo di un vaccino a subunità BVDV mediante (i) l'espressione di una forma secreta di una glicoproteina E2 ricombinante utilizzando cellule BHK21 e (ii) la determinazione delle risposte immunitarie nei topi. La glicoproteina E2 è stata modificata mediante eliminazione del dominio di ancoraggio transmembrana C-terminale e fusione con un tag epitopico V5. Ciò ha consentito il rilevamento utilizzando anticorpi monoclonali anti-V5 insieme alla semplice purificazione della forma espressa e secreta di E2 dal mezzo cellulare. Inoltre, abbiamo fuso geneticamente la proteina fluorescente verde (GFP) collegata a E2 tramite una sequenza ribosomiale del virus Thesea asigna 2A (T2A) creando così una poliproteina autoprocessante [GFP-T2A-BVDV-E2trunk-V5], producendo [GFP- Prodotti di traduzione T2A] e [E2trunk-V5]: la fluorescenza della GFP agisce, pertanto, come marcatore surrogato dell'espressione E2, i topi BALB/c sono stati inoculati con [E2trunk-V5] purificato dal mezzo cellulare e sono state osservate risposte immunitarie sia umorali che cellulari . Il nostro sistema di espressione dell’antigene fornisce, quindi, sia (i) un semplice protocollo di purificazione dell’antigene insieme a (ii) una strategia fattibile per un’ulteriore produzione su larga scala di vaccini.

Il virus della diarrea virale bovina (BVDV) è un importante agente infettivo nei bovini, nei suini e in altri ruminanti; provoca diarrea virale bovina e malattie delle mucose, portando a vari esiti clinici che vanno da malattie lievi a malattie acute e gravi potenzialmente letali1. I segni clinici dell'infezione da BVDV comprendono febbre, depressione, anoressia, erosioni della mucosa, secrezione oculare e nasale purulenta, tosse, atonia ruminale, diarrea, aborto e ridotta produzione di latte2. L'infezione da BVDV causa anche immunosoppressione, aumentando così la suscettibilità alla polmonite batterica o virale3. Negli animali con immunosoppressione indotta da BVDV, l’esposizione ad altri agenti patogeni può aumentare notevolmente la loro morbilità e mortalità, con un corrispondente impatto economico dannoso sulle industrie della carne bovina e dei latticini4,5.

Il genoma del BVDV è un RNA a filamento singolo con rilevamento positivo di circa 12,3 kb. Il BVDV appartiene al genere Pestivirus della famiglia Flaviviridae, insieme al virus della malattia di confine (che colpisce gli ovini) e al virus della peste suina classica6. BVDV comprende due genotipi principali: BVDV-1 (Pestivirus A, diviso in 22 sottotipi da BVDV-1a a BVDV-1v) e BVDV-2 (Pestivirus B, diviso in quattro sottotipi da BVDV-2a a BVDV-2d). Un altro pestivirus atipico noto come virus HoBi-like è stato provvisoriamente identificato come BVDV-3, che ha quattro sottotipi7. Ogni BVDV ha due biotipi, citopatico e non citopatico, a seconda degli effetti del virus coltivato su cellule in coltura. Il ceppo non citopatico non danneggia le cellule infette8. Può infettare il feto in via di sviluppo se le mucche vengono esposte al virus durante le prime fasi della gestazione. Inoltre, il BVDV si perpetua nella mandria attraverso la produzione di vitelli persistentemente infetti (PI)9, poiché diventano immunotolleranti al virus e diffondono grandi quantità di virus nel corso della loro vita. Pertanto, gli animali PI sono considerati una delle principali fonti di diffusione del BVDV10. Le misure più efficaci nei programmi di prevenzione del BVDV comprendono misure di biosicurezza, eradicazione dei bovini PI e vaccinazione5,11.

Gli attuali vaccini contro BVDV sono vaccini con virus vivi modificati multivalenti e vaccini con virus inattivati11,12,13,14. I vaccini vivi, attenuati e inattivati ​​disponibili in commercio hanno sicurezza ed efficacia limitate: il vaccino con virus vivo modificato può ritornare alla virulenza e portare a vitelli PI, mentre il vaccino con virus inattivato ha una protezione di breve durata e non può stimolare una risposta immunitaria cellulare15. Pertanto, per la protezione a lungo termine dei bovini contro il BVDV è necessario un vaccino a subunità BVDV sicuro ed efficace.